细胞外囊泡（Extracellular Vesicle， EV）在医药研究中有非常好的应用前景。但如果EV保存条件不当致使其浓度降低，往往也意味着EV活性降低，生物完整性缺失，最终会严重影响EV的应用。所以，在实际应用过程中，如何稳定地保存EV，如何对已保存的EV进行质量评估，也是一项非常重要的工作。

ZetaView是在EV表征中经常用到的一种经典的NTA技术手段。它可以通过实时追踪颗粒运动的方式，检测EV的粒径分布、数量浓度、zeta电位等信息，还可以借助荧光标记的方式，鉴定样品的纯度和生物标志物，对EV样品进行Colocalization分析。因此， ZetaView被广泛应用于EV的表征与鉴定工作中。

今天的文章以某种EV为例，介绍了如何通过ZetaView的荧光检测功能（F-NTA），对所保存的EV样品进行质量评估。该EV样品来源于HEK293T，能表达荧光蛋白CD63 dTomato，同时又通过CD63 APC和CD81 BV421对其进行荧光标记。该样品从-80℃条件解冻后，在25℃下保存0天、3天、6天、10天，再分别通过散射光模式和荧光模式对样品进行检测。

ZetaView检测结果显示（如图1），在散射光模式、CD63-APC荧光模式、dTomato荧光模式下检测到的EV浓度，随着保存时间的延长而明显降低，说明随着保存时间的延长，EV样品在不断降解，导致浓度在不断降低。这三种测试模式下得到的结果是一致的。CD63-APC荧光模式和dTomato荧光模式下，在不同时间点测到的EV浓度基本一致，且均低于相同时间的散射光模式下测到的EV浓度。两种荧光模式下得到的数据可以相互佐证，也进一步证明了以上测试方法的可靠性。有意思的是，CD81-BV421荧光模式下测到的EV浓度变化不大，可能与对应的EV亚群在该保存条件下稳定性很好有关。

图1. 通过ZetaView在散射光模式、CD63-APC荧光模式、CD81-BV421荧光模式、dTomato荧光模式下，分别于第0、3、6、10天测到的EV浓度

另外，如图2所示，在同一测试模式中、不同保存时间下，ZetaView测到的EV粒径值比较稳定，说明EV浓度降低的原因是降解，而不是聚集。不同测试模式下，ZetaView测到的粒径值有一定的差异，这与所检测的EV群体差异有关。

图2. 通过ZetaView在散射光模式、CD63-APC荧光模式、CD81-BV421荧光模式、dTomato荧光模式下，分别于第0、3、6、10天测到的EV粒径

由以上的ZetaView测试数据可以看出，在特定的保存条件下，随着保存时间的延长，该EV样品在不断地降解。该数据从另一方面也证实了ZetaView荧光检测方法（F-NTA）用于EV质量的快速评估的可行性。

尽管以上实验数据繁多，但在ZetaView上，单次进样即可完成以上所有数据的测试，实际上，实验人员还可以进一步对该EV样品进行多荧光标记的Colocalization检测和zeta电位检测。这也使得ZetaView的强大功能在EV表征与鉴定工作中得到更多的体现。